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基因克隆技术的三种策略

基因克隆技术的三种策略
第一版 什么是基因克隆技术

  基因是细胞内染色体上具有遗传效应的DNA分子片段,克隆技术(Cloning)指由众多的基因或细胞群体中通过无性繁殖和选择,获得目的基因或细胞的技术操作。基因克隆(gene cloning)是指某种目的基因的分离过程,通常是从基因组或DNA大片段中分离并获得某一特定的基因或DNA片段,再通过DNA 序列扩增形成由众多拷贝组成的DNA拷贝群体的过程。
 
  基因克隆的策略大致可分为表型克隆(phenotypic cloning)、定位克隆(positional cloning)和侯选定位克隆(candidate positional cloning)三种。表型克隆利用病变组织与正常组织DNA或RNA水平上的差异,进行疾病相关基因的分离与克隆,由于直接联系疾病的表型与基因,故称为表型克隆;定位克隆首先是获取基因在染色体上的位置信息,然后采用各种方法对该基因进行定位和克隆;侯选定位克隆是对定位克隆的改进,该方法首先将致病基因定位到某一染色体区域,然后再找出区域内的所有基因,根据这些基因的生化特性、表达时空特异性、功能结构域等筛选与疾病相关的侯选基因,从中确定致病基因。三种策略各有各的特点,下面分别进行介绍。

第二版 表型克隆

  表型克隆策略不依赖于基因的染色体位置或基因的产物信息,只从疾病的特征出发,比较疾病DNA与正常DNA水平的差异,并直接对变异的DNA进行分离。该方法是疾病基因克隆中的一种新策略,它的特点是既不考虑基因的功能线索,也不考虑基因在染色体上的位置信息,而是直接在疾病与正常样本之间寻找分子水平上的差异,联系疾病的表型与基因,故又称为表型克隆。

  在真核生物中,从个体的生命活动、组织的分化、凋亡到细胞对各种生物、理化因子的应答,本质上都涉及基因的选择性表达。生物体内任意细胞中得以表达的基因不足10%,而这些基因的

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